Ученые из Научно-исследовательского центра биотехнологии РАН разработали подход, который помогает точно определять свиное и куриное мясо в сырых и переработанных продуктах. Сначала авторы выделили ДНК из образцов, добавили короткие нуклеотидные праймерные цепи с метками (биотин и флуоресцеин) и реагенты для амплификации рекомбиназной полимеразы. Этот процесс осуществляется при постоянной температуре, без специальных инструментов для более сложных амплификаций. В результате всего за 15 минут количество копий фрагмента ДНК, связанного двумя праймерами, резко возрастает. В данной разработке для генерации выявляемой ДНК использовался ген одного из митохондриальных белков курицы и свиньи.
Качество мясной продукции
Полученный раствор капали на тест-полоски с молекулами стрептавидина, которые могут избирательно связывать биотин в зоне детекции. В результате необходимая ДНК прикреплялась к полоске. После этого ученые добавили золотые наночастицы с иммобилизованными антителами к флуоресцеину -; после связывания наночастиц появлялся цвет на тест-полоске. Такой многослойный "сэндвич" снижает риск ошибочных результатов и повышает надежность теста.
Биохимики протестировали эту систему на образцах, предоставленных партнерами из Федерального исследовательского центра пищевых систем имени В.М. Горбатова РАН: фарше с различным содержанием курицы, свинины и говядины, а также мясных полуфабрикатах, изготовленных по государственным стандартам.
Ученые сравнили два варианта выделения ДНК: стандартный длительный и быстрый. При сокращении времени подготовки образца яркость окраски тест-полоски немного уменьшилась. Тем не менее, трех минут уже было достаточно, чтобы надежно обнаружить изменения цвета в зоне детекции и сделать вывод о фальсификации -; если бы в продукт добавили курицу или свинину, когда это не должно было быть по рецепту.
